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液相色譜柱的使用流程

更新時(shí)間:2015-09-15瀏覽:1387次
液相色譜柱的使用流程:
    液相色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行( 出廠測試所使用的條件是*條件) ,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
    1 、樣品的前處理:
    a 、使用流動(dòng)相溶解樣品。
    b 、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
    c 、使用0.45 μm 的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
    2 、流動(dòng)相的配制:
    液相色譜柱是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
    a 、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中( 或長時(shí)間保留在柱中) 。
    b 、流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)( 特殊情況除外) 。
    c 、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命( 可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度) 。
    d 、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV 檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
    e 、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
    f 、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
    3 、流動(dòng)相流速的選擇:
    因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的液相色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm 的色譜柱,流速一般選擇1ml /min ,對于內(nèi)徑為4.0mm 柱,流速0.8ml /min 為佳。
    當(dāng)選用*流速時(shí),分析時(shí)間可能延長??刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間( 如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量) 。

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