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液相色譜柱的使用流程
更新時間:2015-09-15
瀏覽:1224次
液相色譜柱
的使用流程:
液相色譜柱
在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行( 出廠測試所使用的條件是*條件) ,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
1 、樣品的前處理:
a 、使用流動相溶解樣品。
b 、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c 、使用0.45 μm 的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2 、流動相的配制:
液相色譜柱
是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
a 、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中( 或長時間保留在柱中) 。
b 、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學反應( 特殊情況除外) 。
c 、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命( 可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度) 。
d 、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV 檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e 、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。
f 、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3 、流動相流速的選擇:
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的
液相色譜柱
,要追求*柱效,使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm 的色譜柱,流速一般選擇1ml /min ,對于內(nèi)徑為4.0mm 柱,流速0.8ml /min 為佳。
當選用*流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間( 如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量) 。
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